截至2021年，報(bào)導(dǎo)的乳鐵蛋白的檢測(cè)方法包括酶聯(lián)免疫法、高效毛細(xì)管電泳法、生物傳感測(cè)定法、高效液相色譜法、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法等 。
酶聯(lián)免疫法
酶聯(lián)免疫法是一種基於抗原抗體特異性反應(yīng)的檢測(cè)方法，具有反應(yīng)靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。在微孔板中包被抗乳鐵蛋白抗體（一抗），加入目標(biāo)物乳鐵蛋白後，乳鐵蛋白與一抗結(jié)合，再加入乳鐵蛋白抗體（二抗）與之形成夾心結(jié)構(gòu)，最後加入顯色劑，利用酶標(biāo)儀測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，其吸光度值與乳鐵蛋白含量成正比，可繪製標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)達(dá)到定量檢測(cè)樣品中乳鐵蛋白濃度的目的。酶聯(lián)免疫法雖然靈敏度高，但通常需要進(jìn)行多重的孵化、洗滌和清洗，操作較為繁瑣，且所用抗體及抗抗體製備不易，價(jià)格昂貴，不適合用於大批量的樣品分析。
高效毛細(xì)管電泳法
樣品分子擴散係數(shù)越小或分子量越大，毛細(xì)管柱的分離柱效越高。高效毛細(xì)管電泳法大多數(shù)使用石英材質(zhì)的毛細(xì)管為分離通道，用高壓直流電場(chǎng)作為驅動(dòng)達(dá)到液相分離的目的，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn)，但需要解決毛細(xì)管壁對(duì)目標(biāo)物質(zhì)乳鐵蛋白的吸附導(dǎo)致的重複性差的問(wèn)題，且檢測(cè)結(jié)果受樣品複雜基質(zhì)的影響較大。
表面等離子共振技術(shù)
以臨界角入射到不同折射率的兩(liǎng)種金屬介質(zhì)界面的入射光線(xiàn)可以引起金屬產(chǎn)生自由的電子共振，電子吸收光能量使反射光大幅減弱，能夠使反射光在一定角度內(nèi)完全消失的入射角稱(chēng)為SPR角。SPR角隨介質(zhì)表面折射率變化而變化，而折射率的變化又與介質(zhì)表面結(jié)合的分子質(zhì)量成正比，因此可以通過(guò)對(duì)生物反應(yīng)過(guò)程中SPR角的動(dòng)態(tài)變化獲取生物分子之間相互作用的特異信號(hào)達(dá)到檢測(cè)的目的。基於表面等離子體共振技術(shù)的生物傳感免疫測(cè)定法，無(wú)需進(jìn)行標(biāo)記便可實(shí)時(shí)，自動(dòng)檢測(cè)低含量乳鐵蛋白，但實(shí)驗(yàn)溫度及樣品組成影響測(cè)定結(jié)果，儀器設(shè)備造價(jià)也較為昂貴。
高效液相色譜法
高效液相色譜法（HPLC）是利用不同的色譜柱對(duì)不同組分因分配係數(shù)及吸附力大小的不同而被分離，並被檢測(cè)器識別的技術(shù)，其中由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系的反相高效色譜是HPLC中應(yīng)用最為廣(guǎng)泛的一種液相色譜法，優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重複性好，但缺點(diǎn)是對(duì)樣品的純度要求較高，往往需要經(jīng)過(guò)複雜的前處理過(guò)程才能進(jìn)樣。
高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法
質(zhì)譜儀通過(guò)測(cè)量特定離子的質(zhì)核比來(lái)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行準(zhǔn)確定性，通常與高效液相色譜或氣相色譜儀等聯(lián)用來(lái)達(dá)到精確定量的目的。由於蛋白質(zhì)分子質(zhì)量太大，在對(duì)蛋白質(zhì)的分析中，通常將其利用各種手段如胰蛋白酶水解為肽段的混合物，再通過(guò)對(duì)其中的特異性肽段的測(cè)定來(lái)檢測(cè)該蛋白。有報(bào)導(dǎo)稱(chēng)研究人員將蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)與高效液相色譜-質(zhì)譜法相結(jié)合來(lái)檢測(cè)乳製品中的乳鐵蛋白。液相質(zhì)譜法結(jié)果靈敏可靠、重複性高、回收率高，但是需要將蛋白質(zhì)大分子打碎成胺基酸小分子，通過(guò)特定的胺基酸片段來(lái)進(jìn)行定性和定量，此時(shí)蛋白質(zhì)已經(jīng)變形，不利於待測(cè)樣品中對(duì)於乳鐵蛋白是否有活性的判斷，且設(shè)備昂貴，對(duì)操作人員的專(zhuān)業(yè)性要求更高。
文章來(lái)源於百度百科：https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E9%93%81%E8%9B%8B%E7%99%BD/3407131?fr=aladdin
截至2021年，報(bào)導(dǎo)的乳鐵蛋白的檢測(cè)方法包括酶聯(lián)免疫法、高效毛細(xì)管電泳法、生物傳感測(cè)定法、高效液相色譜法、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法等 。
酶聯(lián)免疫法
酶聯(lián)免疫法是一種基於抗原抗體特異性反應(yīng)的檢測(cè)方法，具有反應(yīng)靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。在微孔板中包被抗乳鐵蛋白抗體（一抗），加入目標(biāo)物乳鐵蛋白後，乳鐵蛋白與一抗結(jié)合，再加入乳鐵蛋白抗體（二抗）與之形成夾心結(jié)構(gòu)，最後加入顯色劑，利用酶標(biāo)儀測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，其吸光度值與乳鐵蛋白含量成正比，可繪製標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)達(dá)到定量檢測(cè)樣品中乳鐵蛋白濃度的目的。酶聯(lián)免疫法雖然靈敏度高，但通常需要進(jìn)行多重的孵化、洗滌和清洗，操作較為繁瑣，且所用抗體及抗抗體製備不易，價(jià)格昂貴，不適合用於大批量的樣品分析。
高效毛細(xì)管電泳法
樣品分子擴散係數(shù)越小或分子量越大，毛細(xì)管柱的分離柱效越高。高效毛細(xì)管電泳法大多數(shù)使用石英材質(zhì)的毛細(xì)管為分離通道，用高壓直流電場(chǎng)作為驅動(dòng)達(dá)到液相分離的目的，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn)，但需要解決毛細(xì)管壁對(duì)目標(biāo)物質(zhì)乳鐵蛋白的吸附導(dǎo)致的重複性差的問(wèn)題，且檢測(cè)結(jié)果受樣品複雜基質(zhì)的影響較大。
表面等離子共振技術(shù)
以臨界角入射到不同折射率的兩(liǎng)種金屬介質(zhì)界面的入射光線(xiàn)可以引起金屬產(chǎn)生自由的電子共振，電子吸收光能量使反射光大幅減弱，能夠使反射光在一定角度內(nèi)完全消失的入射角稱(chēng)為SPR角。SPR角隨介質(zhì)表面折射率變化而變化，而折射率的變化又與介質(zhì)表面結(jié)合的分子質(zhì)量成正比，因此可以通過(guò)對(duì)生物反應(yīng)過(guò)程中SPR角的動(dòng)態(tài)變化獲取生物分子之間相互作用的特異信號(hào)達(dá)到檢測(cè)的目的。基於表面等離子體共振技術(shù)的生物傳感免疫測(cè)定法，無(wú)需進(jìn)行標(biāo)記便可實(shí)時(shí)，自動(dòng)檢測(cè)低含量乳鐵蛋白，但實(shí)驗(yàn)溫度及樣品組成影響測(cè)定結(jié)果，儀器設(shè)備造價(jià)也較為昂貴。
高效液相色譜法
高效液相色譜法（HPLC）是利用不同的色譜柱對(duì)不同組分因分配係數(shù)及吸附力大小的不同而被分離，並被檢測(cè)器識別的技術(shù)，其中由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系的反相高效色譜是HPLC中應(yīng)用最為廣(guǎng)泛的一種液相色譜法，優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重複性好，但缺點(diǎn)是對(duì)樣品的純度要求較高，往往需要經(jīng)過(guò)複雜的前處理過(guò)程才能進(jìn)樣。
高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法
質(zhì)譜儀通過(guò)測(cè)量特定離子的質(zhì)核比來(lái)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行準(zhǔn)確定性，通常與高效液相色譜或氣相色譜儀等聯(lián)用來(lái)達(dá)到精確定量的目的。由於蛋白質(zhì)分子質(zhì)量太大，在對(duì)蛋白質(zhì)的分析中，通常將其利用各種手段如胰蛋白酶水解為肽段的混合物，再通過(guò)對(duì)其中的特異性肽段的測(cè)定來(lái)檢測(cè)該蛋白。有報(bào)導(dǎo)稱(chēng)研究人員將蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)與高效液相色譜-質(zhì)譜法相結(jié)合來(lái)檢測(cè)乳製品中的乳鐵蛋白。液相質(zhì)譜法結(jié)果靈敏可靠、重複性高、回收率高，但是需要將蛋白質(zhì)大分子打碎成胺基酸小分子，通過(guò)特定的胺基酸片段來(lái)進(jìn)行定性和定量，此時(shí)蛋白質(zhì)已經(jīng)變形，不利於待測(cè)樣品中對(duì)於乳鐵蛋白是否有活性的判斷，且設(shè)備昂貴，對(duì)操作人員的專(zhuān)業(yè)性要求更高。
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